Sắc ký cột[1]

3.3.2 Sắc ký cột^[1]

Trong sắc ký cột, chất hấp phụ hoặc chất làm nền cho pha cố định được nhồi trong các ống hình trụ gọi là “cột”. Tùy theo tính chất của chất được sử dụng làm cột mà sự tách trong cột sẽ xảy ra chủ yếu theo cơ chế hấp phụ (cột hấp phụ), cơ chế phân bố (cột phân bố), trao đổi ion (cột trao đổi ion),…Ở đây chúng tôi chỉ trình bày sắc ký cột hấp phụ.

 Để có thêm thông tin về các dịch vụ thu hẹp âm đạo, nâng ngực, nâng mũi, vá màng trinh, thẩm mỹ vùng kín, thẩm mỹ môi, thẩm mỹ mắt, thẩm mỹ khuôn mặt, thu hẹp âm đạo, …  và được tư vấn cụ thể về các dịch vụ xin quý khách hàng liên hệ tại đây.

         3.3.2.1 Nguyên tắc

Sắc ký hấp phụ được tiến hành trên một cột thủy tinh thẳng đứng gọi là “cột” với chất hấp phụ đóng vai trò pha tĩnh, dung môi rửa cột là pha động chảy qua pha hấp phụ.

Đối với mỗi chất riêng biệt trong pha hỗn hợp cần tách, tùy theo khả năng hấp phụ và khả năng hòa tan hòa của nó với dung môi rửa cột để lấy ra lần lượt trước hoặc sau.

            Chất hấp phụ trong sắc ký cột thường dung là Oxyt nhôm, silica gel, CaCO₃, than hoạt tính, polyamid.

Sắc ký cột hở được tiến hành ở áp suất khí quyển. Pha tĩnh là chất hấp thu, mẫu chất cần phân tích được nạp lên đầu cột, phía trên là pha tĩnh. Pha động là các dung môi giải ly cột.

         3.3.2.2 Lựa chọn chất hấp thu, dung môi giải ly cột và cách nhồi cột

            Tùy thuộc vào tính phân cực của mẫu chất cần tách mà ta lựa chọn chất hấp thu cho phù hợp. Trong bài luận văn này tôi chọn chất hấp thu là silica gel.

             Trước khi tiến hành sắc ký cột phải tiến hành sắc ký bản mỏng để chọn ra dung môi giải ly phù hợp. Thứ tự dung môi giải ly sẽ bắt đầu từ dung môi không phân cực, dung môi ít phân cực, dung môi phân cực trung bình và sau cùng là dung môi có độ phân cực cao.

             Trước khi tiến hành sắc ký cột cần phải tìm ra cột có kích thước phù hợp. Điều này là rất quan trọng bởi vì hiệu quả của việc tách chất phụ thuộc nhiều vào lượng chất cần tách, chất hấp thu, kích thước cột. Ta có mối tương quan sau đây:

   Tỷ lệ giữa lượng mẫu cần tách và lượng chất hấp thu sử dụng: Các khảo sát thực nghiệm cho thấy muốn tách chất tốt thì trọng lượng của chất hấp thu phải lớn hơn 25 – 50 lần trọng lượng của mẫu sắc ký. Tuy nhiên, đối với những hỗn hợp mẫu chất khó tách riêng thì cần sử dụng lượng chất hấp thu nhiều hơn và ngược lại.

  Tỷ lệ giữa chiều cao chất hấp thu trong cột và đường kính trong của cột sắc ký: Thực nghiệm cho thấy, một mẫu chất muốn tách tốt thì chiều cao chất hấp thu nạp trong cột cần đạt tỷ lệ như sau: chiều cao chất hấp thu : đường kính trong của cột vào khoảng (10 : 1).

       Ø Chuẩn bị cột

      Rửa cột thật sạch, sấy khô, sau đó tráng cột vài lần với acetone.

      Cho bông gòn vào đáy cột (có thể cho thêm một lớp cát mịn sạch).

      Kẹp cột thẳng đứng trên giá sắt. 

      Cho chất hấp phụ vào cột thường gọi là nhồi cột

         vCó hai cách nhồi cột: nhồi cột ướt và nhồi cột khô.

      § Nhồi cột ướt: Dùng cho các chất hấp phụ có khả năng trương nở như silica gel, sephadex,… thì phải ngâm trong dung môi một thời gian trước khi cho vào cột để tránh bị nứt cột. Lắc, trộn đều bột hấp phụ với dung môi tạo thành một hỗn dịch, rót vào cột, chất hấp phụ sẽ lắng tự nhiên xuống đáy cột. Hỗn dịch dung môi và chất hấp phụ không nên quá sệt khiến bọt khí bị giữ trong cột và cũng không được quá lỏng để phải rót nhiều lần vào cột. Chú ý trong quá trình nhồi cột, dung môi vẫn liên tục chảy đều ra khỏi cột và không được để khô dung môi trong cột. Sau khi nhồi hết chất hấp phụ vào cột dùng dung môi hứng được tiếp tục rót vào cột và cho chảy liên tục một thời gian để cột hấp phụ được hoàn toàn ổn định. Mặt thoáng trên đầu cột phải nằm ngang, người ta cho thêm một lớp cát hoặc bông để không làm xáo trộn mặt.

    § Nhồi cột khô: Dùng cho các chất hấp phụ không có khả năng trương nở như Al₂O₃, CaCO₃. Chất hấp phụ được nhồi từ từ vào cột ở dạng khô bởi một phễu có cuống dài. Dùng một que bằng gỗ hoặc cao su gõ nhẹ và đều chung quanh cột theo chiều từ dưới lên để bột xuống đều đặn. Khi chất hấp phụ được cho hết vào cột mới rót dung môi vào và cho chảy liên tục một thời gian để cột được ổn định và từ lúc này trở đi thì không được để khô dung môi trong cột.

Để có thêm thông tin về các dịch vụ thu hẹp âm đạo, nâng ngực, nâng mũi, vá màng trinh, thẩm mỹ vùng kín, thẩm mỹ môi, thẩm mỹ mắt, thẩm mỹ khuôn mặt, thu hẹp âm đạo, …  và được tư vấn cụ thể về các dịch vụ xin quý khách hàng liên hệ tại đây.